大肠杆菌培养(大肠杆菌培养基的制备步骤)

大肠杆菌的检测与培养

希望以下资料能对你有所帮助

试验目的：因为细菌极易产生耐药性，为防止盲目用药减少成本，通过本试验筛选出细菌的高敏药物，从而指导临床用药。

试验原理：通过抑菌圈的大小来判断细菌对药物的敏感度，抑菌圈越大说明细菌对药物越敏感，从而选择。

试验器材:打孔器

圆形滤纸培养皿镊子营养琼脂接种环

分析天平普通天平恒温箱锥形瓶 酒精灯

青霉素瓶冰箱 高压锅各种药品

药敏片的制备：在超净环境下，先用打孔器把滤纸打孔，约5毫米，放在恒温箱干燥备用。用分析天平精密称取要制的药物0.0050克（0.0046~0.0054克），放在青霉素瓶，用注射器打入5毫升蒸馏水溶解，然后放入已制备好的滤纸片浸泡，待滤纸片浸透后，用镊子夹到培养皿里放在恒温箱干燥，干燥后放到青霉素瓶放到冰柜冷藏备用。

培养基的制备：按琼脂瓶上的用量用小天平称取质量，一般是4.5克配100毫升蒸馏水,放入锥形瓶里,用纱布塞住,再用报纸包住口,培养皿用报纸包住,然后锥形瓶和培养皿都放在高压锅内高压灭菌。

高压锅的使用：先往锅内加水至担架处，把要灭菌的物品放入高压锅内胆内，拧紧高压锅盖，对头拧蝶形螺母，插上电源，注意放气阀要开着，待锅内冷空气排出后关闭，然后高压锅自己升温，注意看压力表，到121°并恒温15分钟，然后拔掉电源自然冷却，到压力表降为零，放气，对头拧开蝶形螺母，拿出已灭菌的锥形瓶和培养皿，在超净工作台内趁热将琼脂倒在培养皿内，琼脂覆盖住培养皿底部为准，冷却使之凝固，放入冷藏内备用。

试验步骤：用接种环钩取鸡的肝或心上的菌,涂抹在培养基上（注意不能将培养基划破）,放在恒温箱37°培养约十多小时至长出菌落。再用接种环勾取菌落上的大肠杆菌均匀涂在培养基上（可用十字划线或环行划线法），然后贴上药敏片，距离要均匀，放在恒温箱37度培养至抑菌圈出现。通过抑菌圈大小，判断细菌对药物的敏感度。大肠杆菌一般培养方法

使用牛肉膏蛋白胨培养基

组成成分：牛肉膏 3g,蛋白胨 10g,nacl 5g,琼脂 15～20g,水1000ml,ph7.4～7.6。

具体配置步骤：

1.称药品 按实际用量计算后,按配方称取各种药品放入大烧杯中.牛肉膏可放在小烧杯或表面皿中称量,用热水溶解后倒入大烧杯;也可放在称量纸上称量,随后放入热水中,牛肉膏使与称量纸分离,立即取出纸片.蛋白胨极易吸潮,故称量时要迅速.

2.加热溶解 在烧杯中加入少于所需要的水量,然后放在石棉网上,小火加热,并用玻棒搅拌,待药品完全溶解后再补充水分至所需量.若配制固体培养基,则将称好的琼脂放入己溶解的药品中,再加热融化,此过程中,需不断搅拌,以防琼脂糊底或溢出,最后补足所失的水分.

3. 调ph 检测培养基的ph,若ph偏酸,可滴加lmol/l naoh,边加边搅拌,并随时用ph试纸检测,直至达到所需ph范围.若偏碱,则用lmol/l hcl进行调节.ph的调节通常放在加琼脂之前.应注意ph值不要调过头,以免回调而影响培养基内各离子的浓度.

4.过滤 液体培养基可用滤纸过滤,固体培养基可用4层纱布趁热过滤,以利培养的观察.但是供一般使用的培养基,这步可省略.

5.分装 按实验要求,可将配制的培养基分装入试管或三角瓶内.分装时可用漏斗以免使培养基沾在管口或瓶口上而造成污染. 分装量:固体培养基约为试管高度的l/5,灭菌后制成斜面.分装入三角瓶内以不超过其容积的一半为宜.半固体培养基以试管高度的1/3为宜,灭菌后垂直待凝.

6.加棉塞 试管口和三角瓶口塞上用普通棉花(非脱脂棉)制作的棉塞.棉塞的形状,大小和松紧度要合适,四周紧贴管壁,不留缝隙,才能起到防止杂菌侵入和有利通气的作用.要使棉塞总长约3/5塞入试管口或瓶口内,以防棉塞脱落.有些微生物需要更好的通气,则可用8层纱布制成通气塞.有时也可用试管帽或塑料塞代替棉塞.

7.包扎 加塞后,将三角瓶的棉塞外包一层牛皮纸或双层报纸,以防灭菌时冷凝水沾湿棉塞.若培养基分装于试管中,则应以5支或7支在一起,再于棉塞外包一层牛皮纸,用绳扎好.然后用记号笔注明,培养基名称,组别,日期.

8.灭菌 将上述培养基于121.3℃湿热灭菌20min.如因特殊情况不能及时灭菌,则应故人冰箱内暂存.

9.无菌检查 将灭菌的培养基放入37℃温箱中培养24～48h,无菌生长即可使用,或贮存于冰箱或清洁的橱内,备用.

大肠杆菌的培养：

37摄氏度，恒温培养48到72小时，因为接种时和具体培养条件的不同，其生长一般都在2天外才能长出明显的菌落。

菌落特征：乳白色，圆形，菌落边缘整齐，表面光滑，表面和背面颜色一致

简述大肠杆菌的培养特性及抗原结构?

大肠杆菌是人和许多动物肠道中最主要且数量最多的一种细菌，周身鞭毛，能运动，无芽孢。主要生活在大肠内。

1、大肠杆菌是细菌，属于原核生物;具有由肽聚糖组成的细胞壁，只含有核糖体简单的细胞器，没有细胞核有拟核;细胞质中的质粒常用作基因工程中的运载体。大肠杆菌放大7万倍

2.大肠杆菌的代谢类型是异养兼性厌氧型。

3.人体与大肠杆菌的关系:在不致病的情况下(正常状况下)，可认为是互利共生(一般高中阶段认为是这种关系);在致病的情况下，可认为是寄生。

大肠杆菌的抗原结构复杂，可分为菌体抗原(O)、鞭毛抗原(H)和表面抗原(K)，后者有抗机体吞噬和抗补体的能力。根据菌体抗原的不同，可将大肠杆菌分为150多型，其中有16个血清型为致病性大肠杆菌，常引起流行性婴儿腹泻和成人肋膜炎。大肠杆菌是研究微生物遗传的重要材料，如局限性转导就是1954年在大肠杆菌K12菌株中发现的。莱德伯格(Lederberg)采用两株大肠杆菌的营养缺陷型进行实验，奠定了研究细菌接合方法学上的基础，以及基因工程的研究。

4.在培养基培养时无需添加生长因子，向培养基中加入伊红美蓝遇大肠杆菌，菌落呈深紫色，并有金属光泽，可鉴别大肠杆菌是否存在。

5.大肠杆菌在生物技术中的应用:大肠杆菌作为外源基因表达的宿主，遗传背景清楚，技术操作简单，培养条件简单，大规模发酵经济，倍受遗传工程专家的重视。目前大肠杆菌是应用最广泛，最成功的表达体系，常做高效表达的首选体系。

6.大肠杆菌在生态系统中的地位:假如它生活在大肠内，属于消费者，假如生活在体外则属于分解者。

7.它的基因组DNA为拟核中的一个环状分子，同时可以有多个环状质粒DNA。

8.大肠杆菌细胞的拟核有1个DNA分子，长度约为4 700 000个碱基对，在DNA分子上分布着大约4 400个基因，每个基因的平均长度约为1 000个碱基对。同问。。。